植物花青素合成酶(ANS)ELISA試劑盒實驗原理

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定樣品指標水平。樣品包括血清血漿尿液腦脊液細胞固體組織等，用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入樣品，再與HRP標記的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中濃度，或者與CUTOFF值相比較，從而判定標本陰陽性。

　　BS-8058  植物花青素合成酶(ANS)ELISA檢測試劑盒  96T/48T

　　ELISA試劑盒組成

　　1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶

　　2 酶標試劑 6ml×1瓶

　　3 酶標包被板 12孔×8條

　　4 樣品稀釋液 6ml×1瓶

　　5 顯色劑A液 6ml×1瓶

　　6 顯色劑B液 6ml×1/瓶

　　7 終止液 6ml×1瓶

　　8 標準品 0.5ml×1瓶

　　9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶

　　10 封板膜 2張

　　樣品收集、處理及保存方法

　　1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉 離心10分鐘將血清和紅細胞迅速 小心地分離。

　　2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

　　3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

　　4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

　　5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在 室溫下解凍并確保樣品均勻地充 分解凍。

　　樣本要求

　　1.樣本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　植物花青素合成酶(ANS)ELISA試劑盒操作步驟

　　1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照隨貨說明書中圖表在小試管中進行稀釋。

　　2.加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　7.溫育：操作同3。

　　8.洗滌：操作同5。

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

　　11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

　　計算

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

　　植物花青素合成酶(ANS)ELISA試劑盒注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4.請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　10.保存2-8℃。

　　11.有效期：6個月